blot(westernblotting中的一抗和二抗有什么用)

blot，westernblotting中的一抗和二抗有什么用？

一抗就是针对你的蛋白的抗体，一般比较特异，若你的蛋白不是常见的，则需要定制（譬如用你的蛋白注射兔子）二抗是针对一抗的抗体，看你的一抗来自哪种动物，它具有普遍性。不管你的蛋白是什么，只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗，二抗就都可以用同一种抗兔的。

所以商品化程度很高二抗上一般链接一些基团，经反应后显色可以检验目标蛋白

blot电泳原理？

（本实验以转移到PVDF膜，辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法为例）在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中，不连续系统的凝胶包括浓缩胶（spacergel）和分离胶(separation gel)，蛋白质在浓缩胶中运动到两层凝胶的交界处时，由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带，即不连续系统的浓缩效应。

在凝胶中，分子量小的蛋白质泳动速度快，分子量大的蛋白质泳动速度慢，即聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应。阴离子去污剂SDS使蛋白质变性，消除不同蛋白分子间的电荷差异和结构差异，使得蛋白质在电场中的泳动速度仅与蛋白质颗粒大小有关。各种蛋白质在不连续SDS-PAGE的浓缩效应和分子筛效应的作用下，按照分子量大小以一定顺序排列形成一个个区带。

westernblot的一抗要用鼠源的吗？

不是啊，一定要用抗小鼠的抗体，但是来源可以是其他物种，大鼠，兔，山羊等。

westernblot的目的？

Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。