核酸外切酶(保证遗传信息的准确传递三个点)

核酸外切酶，保证遗传信息的准确传递三个点？

保证遗传信息的准确传递三个关键点：

1、DNA复制的准确性：

DNA聚合酶依赖模板，保证遗传信息传代延续中子链与母链配对准确无误。DNA聚合酶具有核酸外切酶活性，复制中出错时有即时校读功能，随时把错误配对的核苷酸切除，并利用其DNA聚合酶活性补回正确的核苷酸。遵守严格的碱基互补配对规律。

2、RNA转录的准确性：RNA聚合酶以DNA双链中的有义链作为模板，严格按照碱基互补配对规律进行合成。RNA聚合酶能够识别模板上的启动子和终止子。

3、蛋白质合成的准确性：在氨酰tRNA合成酶的作用下，形成氨基酰－tRNA，进入核糖体。氨酰tRNA合成酶具有绝对的专一性，既能特异识别AA，又能特异识别tRNA，使tRNA与其特异AA结合。如出差错，酶还可以“校正”。蛋白质的序列是由mRNA分子上的密码子排列决定的。通过tRNA上的反密码子识别mRNA上的密码子，一个一个地按顺序进行识别，从而合成多肽链。

质粒层析纯化的基本原理？

溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯——溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。

从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。

最新方法

最近已得到改进（R.Treisman,个人通讯）并达到较高境界， 使用该方法可得到极高纯度的质粒。聚乙二醇分级沉淀法与氯化铯——溴化乙锭梯度平衡离心法有一点不同，那就是不能有效地把带切口的环状分子同闭环质粒DNA分开，因此， 纯化容易带上切口的极大质粒（大于15kb）。用于生物物理学测定的闭环质粒时，平衡离心仍是首选的方法。 然而， 两种纯化方法都可得到足以胜任分子克隆中各种复杂工作的质粒DNA，包括用于哺乳动物细胞的转染以及利用外切核酸酶产生成套的缺失突变体。

氯化铯——溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA。

RNaseD和RNaseP的作用？

rnase e f d p 是按顺序加工原核生物TRNA 的， 外切核酸酶RNASED 一次切去3端区域7个核苷酸 接着RNASEP进行内切产生出成熟的trna5 端 接着D再除去3端余下两个核苷酸，然后形成成熟3端

DNA的忠实性是如何保护的？

主要是由于DNA聚合酶 polymerase 具有3'-5'核酸外切酶的活性 。当复制过程中发生错误 ，聚合酶就回头切除错配的碱基 然后继续合成 ，这样就可以保证准确性。

首先复制的时候DNA聚合酶有校对功能，保证DNA复制的精确性。

其次，DNA转录阶段，RNA聚合酶虽然没有校对功能，但是由于RNA本身用于翻译蛋白质，存在错误碱基蛋白可能无功能，造成的影响可有正常蛋白屏蔽。

第三，在RNA剪切和编辑的过程中，依赖精确的碱基位置，稍有差错，就不能产生成熟RNA。

第四，DNA出现损伤的时候，有许多强大的修复系统保证DNA序列的完整忠实。

polg什么意思？

线粒体聚合酶γ(mitochondrial DNA polymeraseγ,POLG)基因编码的蛋白质具有DNA聚合酶、3-5'核酸外切酶和5'dRP裂解酶等活性。