怎么看懂液相色谱图(高效液相色谱的正相与反相怎么区分)

怎么看懂液相色谱图，高效液相色谱的正相与反相怎么区分？

根据流动相，固定相之间的极性大小 来区分的 。

正相反相取决于固定相的极性高于流动相是正相反之则反。

流动相极性大于固定相，称之为反相。

流动相极性小于固定相，称之为正相。

看色谱柱的固定相填料是什么：

正相色谱法： 采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

反相色谱法： 一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。

看固定相，固定相是非极性，就是反相如OL C18，固定相是极性就是正相如OLSI（硅胶）

高效液相色谱峰怎么计算含量？

高效液相色谱仪定量分析是一种相对分析，是通过对已知含量的物质和待测样品在相同条件下进行分析，得到数据后进行对照计算，推算出含量的。如题中已经知道未知含量物质的峰面积后，你还无法得到含量，如果需要得到绝对含量数据，还需要将一个已知含量的样品（标准样品）在同一条件下进行一次分析，得到相同物质组份的峰面积，然后根据双方面积比例计算出待测样品的绝对含量；

如果是相对含量（待测组份在总样品量中的比例），也需要通过一个知道相对含量的标准样品来对照计算；

液相色谱仪使用步骤？

答：液相色谱仪使用步骤如下

1、开机

1.1打开电脑。

1.2打开液相色谱仪各个模块的电源。

1.3双击桌面“仪器-联机”，进入联机界面。

1.4排气：

1.4.1手动旋开泵处冲洗阀。

1.4.2右键单击“泵”图标区域，选择“方法”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min，点击“确定”。

1.4.3右键单击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内无气泡为止，，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.4.4右键单击“泵”图标，点击“方法”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。

1.4.5右键单击“泵”图标，点击“方法”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。

1.4.6同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制”选项，“ON”打开液相色谱仪柱温箱和检测器。

液相色谱分离度偏低什么原因？

不管是纯度高的样品还是纯度低的样品，进样之后，得到的结果都很纯 基本上都达到了99%；可以这么说，进样后的样品根本没有得到分离，在其色谱图上基本上只是看到一个色谱峰，说明你的样品分离条件没有选择好。

通常情况下样品液相色谱分析的分离条件都可以在文献中查到，只要你严格按文献的分离条件操作就能得到很好的分离度，除非你使用的色谱柱的柱效已经严重下降。

有了合适的色谱条件还应注意以下几点：1、样品的进样量；同样条件下进样量越少，柱效越高。

2、柱温；同样条件下柱温越高，柱效越高。

3、注意色谱柱与仪器的管线连接；管线越细，死体积越小，可以改善样品分离度（建议尽量使用厂家提供的连接套件）。

4、严格掌握流动相的比例；流动相的比例是控制样品洗脱的关键因素。

利用高效液相色谱仪定性的方法有几种？

采用对照品，用保留时间定性——可能会误判；LC-DAD，用紫外光谱定性——对大多数化合物没什么用；LC-MS，用质谱定性，还可以用多级质谱——准确、方便，就是设备太贵；LC-FTIR，用红外定性——听说过，没见过；采集馏分，进行结构鉴定——准确，太麻烦。